面神经缺损修复以及神经元凋亡及其调控的实验研究

项目名称:

面神经缺损修复以及神经元凋亡及其调控的实验研究

项目第一完成人及单位名称:

昆明医学院附属口腔医院

项目研究起止年月:

2003年 5月至2009年5月

项目研究经费来源:

云南省自然科学基金（2006C0002R）

项目简介：

本研究探讨利用神经再生室以及组织工程技术修复兔面神经缺损的可行性及优越性，寻找一种新的，简单、有效修复长段神经缺损的手术方法。同时研究大鼠面神经总干压榨伤及总干切断伤后，其面神经元的形态学改变及凋亡相关基因的表达变化及其相互关系，并探讨面神经损伤后局部及全身用药对其神经元的保护及其功能恢复的作用。

方法:第一部分为再生室及组织工程修复兔面神经缺损的实验研究。手术制作兔面神经下颊支15mm缺损模型，分别用不同方法修复：几丁聚糖—胶原再生室双桥接小间隙组、双桥接无间隙组、翻转静脉复合异种去细胞神经基质桥接修复组以及原位神经吻合组。术后通过大体观察、神经电生理检测、组织学观察以及图像分析来评价神经再生恢复情况。第二部分为面神经损伤后诱导面神经元凋亡及相关基因表达的实验研究。通过制作大鼠面神经总干切断伤、不同损伤程度的总干压榨伤、切断伤局部使用GDNF及总干压榨伤和总干切断伤分别口服米诺环素组。通过大体观察了解不同程度压榨伤神经功能恢复情况，组织学观察及透射电镜观测术后各期实验组与正常对照组面神经元的形态学变化。免疫组织化学法、图像分析技术检测实验组及正常对照组面神经元内bcl-2、p53 、caspase 3、caspase 8和cyto-c的基因表达变化。

结果：⑴几丁聚糖—胶原再生室吸收明显且无异物反应，可为神经再生提供良好的微环境；⑵双桥接小间隙与双桥接无间隙组均能有效修复长段面神经缺损，其神经传导速度与原位神经吻合组无差异，轴突再生率与原位吻合组无差别，但再生轴突成熟度和有髓神经面积恢复率略低于原位吻合组；⑶翻转静脉复合异种去细胞神经基质桥接修复面神经缺损取得了与自体神经移植几乎相同的修复效果；⑷不同损伤程度面神经总干压榨伤后，其神经元反应不同，严重压榨伤可引起神经元死亡；⑸神经总干切断伤会引起神经元死亡，于术后21-28d时达到死亡高峰，神经元数目明显少于正常对照组；⑹面神经损伤后各蛋白表达与神经损伤形式有关。面神经干切断21d时BCL-2/P53比值达最低, 切断侧神经元死亡率与BCL-2/P53的比值有明显相关性。Caspase 8, Cyto-c蛋白表达与Caspase 3蛋白表达相关；⑺局部应用GDNF对面神经切断伤后其神经元有明显的保护作用；⑻口服米诺环素对压榨伤后的面神经有明显的恢复作用，对总干切断伤后的面神经无恢复作用，但对总干切断伤后的面神经元有显著的保护作用。

结论：⑴双桥接技术修复长段神经缺损方法简单、效果肯定；⑵异种神经去细胞处理后复合翻转静脉修复兔面神经缺损效果与自体神经移植相同；⑶面神经元是否发生凋亡以及凋亡数目与其神经干受损伤形式有关；⑷多种基因和蛋白参与面神经总干切断后诱导其神经元凋亡过程的调控；⑸局部和全身用药对面神经功能恢复及其神经元有显著保护作用。